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翼首草总苷治疗实验性类风湿性关节炎的主要药效学研究
添加时间: 2019-4-14 16:49:09 来源: 作者: 点击数:

报告正文

一、立项依据与研究内容

(一)项目的立项依据

目前,国内外治疗 RA 的药物主要有非甾体抗炎药(non-steroidal anti-inflammatory drugsNSAIDs)、糖皮质激素(glucocorticoid drugsGCS)、 缓解病情抗风湿药(disease-modifyinganti-rheumatic drugsDMARDs)、生物制剂、天然药物中有效成分等,其中天然药物有效成分又包括了苷类、萜类、生物碱类、黄酮类等。然而,这些药物往往具有多方面毒副作用,长期应用受到限制。例如,NSAIDs 长期使用损害心血管系统,GCS 长期使用诱发骨质疏松与骨折,TNF-α 拮抗剂长期使用引发结核感染力增加,雷公藤多苷长期使用损伤生殖系统等[14-18]。因此,开发毒副作用小能够长期应用于 RA 疾病的新药是每个 RA 疾病药物研究者工作的重要内容。

众所周知,中医理论体系的两大基本特点是“整体观念”和“辩证论治”,而“辩证论治”的关键环节是“审察病机”,病机的核心内容是病理因素[19]。中医中“辩证用药”实则为辩病机用药。此病机实则与现代疾病研究的发病机制相似,众所周知,疾病的发病机制是开发疾病针对性治疗药物达到疾病治愈的关键环节[19],因此,对 RA 疾病的发病机制的研究是开发长期应用于 RA 疾病的新药迫切解决的难题。迄今为止,人们发现与 RA 的发病原因有环境因素、遗传因素等。根据对观察到的 RA 患者自身紊乱的种种表现以及致病因素的之间的相关性分析,人们对 RA 的发病机制假说提取了多种假说如分子模拟、表位的扩张、模糊识别、免疫细胞衰老等,然而确切的 RA 发病机制仍然不够明了。针对 RA 发病机制的研究现状,通过代谢组学研究技术,对 RA 疾病生物体体内代谢物变化进行研究,对了解 RA 发病机制具有重要意义。

翼首为藏族习用药材之一,在“南派藏医药”中,翼首草被喻为地上“七种仙草”之一[31]。为川续断科植物匙叶翼首草 Pterocephalushookeri (C.B. Cl- arke)Hoeck 的干燥全草。《中华人民共和国药典》2015 年版对其功效载有“解毒除瘟,清热止痢,祛风通痹”,气微,性苦、寒,有小毒[32]。敦煌本吐蕃医学文献《长卷》、《医学千万舍利》、《晶珠本草》、《西藏常用中草药》、《藏药志》《中华本草 藏药卷》、卫生部药品标准 藏药等都有记载其对风湿或关节炎有治疗作用[33]。据调查发现,翼首草为藏医总结出的对 RA 行之有效且疗效良好的组合用药方法中出现的次数较高的单味药[34]。藏医大家塔莫 洛桑曲扎曾明确提出,治疗热真布用二十五味驴血丸,治疗寒真布用翼首草、诃子为主药的治疗方法[35]。现代化学研究表明,翼首草含有皂苷类、环烯醚萜类、黄酮类、生物碱类、多糖类等多种化学成分,主要含有齐墩果烷型五环三萜皂苷类化合物和环烯醚萜类化合物[36-37]。现代药理实验证实,翼首草正丁醇提取物有很强的抗肿瘤活性,对肝癌细胞增殖有明显抑制作用,并呈现剂量依赖性[38],翼首草乙醇及水提取具有镇静、中枢和外周镇痛作用[39],翼首草正丁醇总皂苷提取物、乙醇提取物、水提取物对急性炎症有明显治疗作用[40-43]。

随着高通量及高分辨率的检测技术的不断发展,代谢组学广泛的应用于生物学和医学相关领域中植物细胞代谢、微生物代谢、疾病的诊断、新药的筛选和开发,药物作用机制的研究、药物毒性的评价、个性化治疗疗的研究等。近几年,代谢组学已经成为了研究 RA 的重要手段,对 RA 治疗药物的研究已经成为了代谢组学研究的重要内容[48-50]。目前,利用代谢组学研究 RA 的样本包括了 RA 患者的血清/血浆,RA 患者关节滑液,RA 模型动物的血清/血浆、RA 模型动物尿液、RA 模型动物滑膜组织等。代谢组学被广泛应用于寻找 RA 疾病各期、RA 疾病的亚型(风寒湿型与风寒热型)、RA 疾病模型、药物对 RA 疾病、药物对 RA 疾病模型的差异性代谢物,进而去探索 RA 疾病代谢物变化特征和发病机制、药物治疗 RA 疾病代谢物变化特征和治疗机制。人们应用代谢组学研究治疗 RA 的药物包括了 NSAIDsGCS、生物制剂(TNF-a 拮抗剂)以及中药。例如,甲氨蝶呤、依那西普、英夫利昔、云南白药、吲哚美辛、布洛芬、黄连解毒汤、四妙丸、乌头汤、雷公藤多苷、铁线莲三萜皂苷、新痹痛灵、复方祖师麻等[51-56]。涉及尿酸、牛磺酸、组氨酸、甲硫氨酸、甘氨酸、次黄嘌呤等多种差异性代谢物,影响嘌呤代谢、核酸代谢、能量代谢、氨基酸代谢、脂肪酸代谢等多个代谢通路。

(二)项目的研究内容、研究目标,以及拟解决的关键科学问题。

.主要研究内容

1. 采用 10mg·mL-1 CFA 足趾皮下注射的方法建立 AA 大鼠模型。造模成功后,连续灌胃给予翼首草总苷 0.058g·L-10.116g·L-10.232 g·L-1溶液 30 d,检测大鼠足趾肿胀系数、体重系数、胸腺系数、肾上腺系数、脾脏系数。

2. 采用 ELISA 法测定大鼠血清中 NOCRPIL-1β 、TNF-aIL-17 炎症因子水平的含量。采用 ELISA 法测定大鼠膝关节滑膜 NF-κ B 水平的含量。

3. 采用 HE 染色法观察大鼠踝关节滑膜病理的改变。

4. 采用 LC-MS 技术和多元统计的的分析方法结合代谢组学相关数据库对正常组大鼠、AA 模型组大鼠、各给药组大鼠的血清进行代谢组学研究分析,通过分析正常组大鼠与 AA 模型组大鼠代谢组变化情况,寻找 AA 模型血清中差异性代谢物。采用通路富集分析,确定 AA模型大鼠血清中差异性代谢物对其代谢通路的影响情况。通过 IPA 建立差异性代谢物代谢网络。通过分析 AA 模型组大鼠与翼首草总苷组大鼠代谢组变化情况,观察翼首草总苷对 AA大鼠的治疗作用,寻找可以评价翼首草总苷疗效的差异性代谢物。

.研究目标

RA 作为一种侵袭性关节炎为主的全身性自身免疫疾病,本研究通过建立 AA 大鼠模型模拟 RA 疾病,运用代谢组学技术研究 AA 大鼠体内异常代谢。

结合药效学实验,揭示翼首草总苷对 RA 的药效和作用机制,为翼首草总苷的临床应用提供实验依据。

.拟解决的关键科学问题

翼首草总苷对 AA 大鼠有治疗作用。翼首草总苷对 AA 大鼠的治疗作用可能与药物影响体内炎症因子以及关节滑膜 NF-κB 表达相关,产生抗炎作用以达药效。代谢组研究结果显示AA 大鼠血清中差异性代谢物 27 个,明显影响氨基酸代谢,嘌呤代谢,谷胱甘肽代谢。翼首草总苷对 27 个差异性代谢物中 15 个能够回调。色氨酸、吲哚、精氨酸、脯氨酸、丝氨酸、谷氨酰胺 6 个可作为临床 RA 疾病的潜在生物标志物。

(三)拟采取的研究方案及可行性分析。

.研究方法

 2.1 大鼠 AA 模型的建立

SD 健康大鼠 48 只,适应喂养性饲养 7 d,用大鼠体重称测量大鼠体重。用记号笔分别绕大鼠后肢踩关节处划线作记号,以后没 3 天划线 1 次(每次划线处相同,以保证测量位置相同)。用大鼠足趾肿胀仪测定正常状态下大鼠左、右踝足趾的容积(mL)2 次,算取平均值。随机选取 8 只医用消毒棉签蘸取 75%酒精对大鼠右后足进行消毒,每只大鼠右足趾皮内注射0.1 mL 氯化钠溶液(0.9 %m/v)。其余 40 只大鼠医用消毒棉签蘸取 75%酒精对大鼠右后足进行消毒,注射 0.1 mL 完全弗氏佐剂(Complete Freund's adjuvantCFA (10mg mL-1),致炎后测量大鼠左、右足趾容积[61--62]。

2.2 分组方法

模型复制当天记为致炎第 1 d,致炎 17 d 后,注射 0.1 mL 氯化钠溶液的大鼠作为正常大鼠、将注射 0.1 mL CFA (10mg mL-1)造模成功的 40 AA 大鼠随机分为 5 个组:模型对照组、醋酸地塞米松组、翼首草总苷低剂量组、翼首草总苷总剂量组、翼首草总苷高剂量组、每组8 只。

2.3 给药方法

根据《中华人民共和国药典》2015 版及《中华人民共和国卫生部藏药部颁标准》记载,翼首草成人日用量为 1-3g/60kg(以原药材计)。称取翼首草总苷粉末,采用蒸馏水配制至成低、中、高 3 个剂量翼首草总苷水溶液,地塞米松配片蒸馏水配制相应浓度。空白组,模型组灌胃相应容积蒸馏水。受试药物剂量以原药材计见表 1.1

1.1 翼首草总苷剂量设置表

组别 受试药物 受试药物剂量/体重(g/kg) 相当于临床成人用量的倍数正常组 蒸馏水 — —模型组蒸馏水 — —醋酸地塞米松组醋酸地塞米松片0.0016TGPH 低剂量组翼首草总苷0.0586.25TGPH 中剂量组翼首草总苷0.11612.5TGPH 高剂量组翼首草总苷0.232 25

根据据 CFA 诱发 AA 模型的特点,继发病变一般出现在致炎后 10-15d 左右,故观察药物对 RA 的治疗效果时,选择经足肿胀测量后,模型组大鼠足趾与正常组比较明显肿胀,造模成功(致炎 17d)后开始给药。给药周期 30 d,每天早上灌胃一次。灌胃体积每千克大鼠灌胃 1ml 溶液。

血清样本处理

-80 冰箱取出血清,梯度平衡至室温。移液枪精密抽取 100μL 血清放于 1.5mL 离心管中,加0.3mL甲醇,10μL内标物(2-氯苯丙氨酸),涡旋仪涡旋30s,于高速离心机4℃、12000rpm离心 10min,移取 200μL 上清液,转入进样小瓶中,备用。2.6 LC-MS 分析色谱分离条件为:柱温为 40 °C 得;流速 0.3 mL/min;流动相组成 A:水+0.1%甲酸,B:乙腈+0.1%甲酸;梯度洗脱程序见表 2.1。进样量为 4 μL,自动进样器温度 4 °C

血清代谢组学研究方法学

随机选取一样本,按1.2 方法制备 6 次,按 1.3 LC-MS 分析条件,分别在正负离子模式下进样 6 次,选择正离子模式下质荷比为 98.96204.12523.36,负离子模式下 94.43187.01319.23 对保留时间和峰面积进行考察,对其保留时间和峰面积进行均值和相对标准误差(RSD),考察样本的制备方法进行重复性。随机选取一样本,按 1.2 方法制备样本一次,分成 6 等份,作为稳定性测试样本。每检测 5 个样本后,稳定性样本进针一次,按此方式稳定性样本检测 6 次。同重复性考察,选择正离子模式下质荷比为 98.96204.12523.36,负离子模式下 94.43187.01319.23 对保留时间和峰面积进行考察,对其保留时间和峰面积进行均值和相对标准误差(Relative standard deviation ,RSD),考察样本及仪器的稳定性。方法学重复性稳定性考察数据见表 1.2。同时对重复性检测样品的总离子流色谱图(TIC)色谱图进行重叠,如图 2.1- 2.2 所示。稳定性检测 TLC 色谱图与重复性检测 TLC 类似,文中便不以赘述。结果显示,重复性实验正离子模式下,保留时间 RSD 0.04%-1.28%范围内,峰面积 RSD1.63%-4.34%范围内;负离子模式下,保留时间 RSD 0.82%-4.2%范围内,峰面积 RSD 1.16%-3.68%范围内,表明正负离子模式下,保留时间与峰面积 RSD5%,在可接受范围内,样本制备方法重复性良好。稳定性实验正离子模式下,保留时间 RSD 0.04%-1.32%范围内,峰面积在 3.86%-13.75%范围内;负离子模式下,保留时间 RSD 0.98%-5.48%范围内,峰面积在 3.42%-6.56%范围内,表明正负离子模式下,保留时间与峰面积在可接受范围内。

2.5 统计方法

采用 SPSS 19.0 统计软件进行统计分析。计量资料以均数 标准差( x±s)表示结果,经正态性检验和方差齐性检验,数据服从正态分布且方差齐性。多组间比较采用单因素方差分析,两两比较用 LSD 检验,P<0.05 时,为差异有统计学意义。

数据在 SIEVE 软件(Thermo 公司)对 LC/MS 数据进行预处理,并在 EXCEL 2010 软件中进行归一化及后期编辑,将最终结果组织为二维数据矩阵,包括变量(rt_mz,即保留时间_质荷比)、分子量(compMW)、观察量(样本)和峰强。将编辑后的数据矩阵导入 SIMCA-P13.0软件(Umeteics,Umea, Sweden)进行主成分分析(PCA)。为获得显著性差异性代谢物信息,进一步采用监督性的多维统计方法即偏最小二乘判别分析(PLS-DA )PLS-DA 分析后,取 VIP(Variable importance in projection) >1 的所有数值进行显著性统计分析 (SigmaStat 3.5,Germany),并结合 t-test 检验的 P 值(P0.05)来寻找差异性代谢物。

.关键技术说明:

 2.4 检测指标

2.4.1 足趾肿胀率检测

采用大鼠足趾肿胀仪测量大鼠于致炎前、给药第 1 d、给药第 10 d、给药第 20 d、给药第 30 d 右后足膝关节以下足趾体积,记录结果,计算足趾肿胀率。足趾肿胀率= (致炎后所测值-致炎前所测值) /致炎前所测值 100%63]。

2.4.2 体重增长率的检测测量大鼠于致炎前、给药第 1 d、给药第 10 d、给药第 20 d、给药第 30 d 体重变化计算体重增长率。体重增长率=(致炎后所测值-致炎前所测值)/致炎前所测值 100%64

2.4.3 胸腺、脾、肾上腺系数检测给药第 30 d,实验每组大鼠末次给药后 1h,腹主动脉取血后大鼠分别摘取胸腺、脾、肾上腺并称重,计算脏器指数=脏器(mg)/体重(kg),观察药物对 AA 大鼠免疫器官的影响。

2.4.4 踝关节滑膜病理观察给药第 30 d,大鼠乙醚吸入麻醉腹主动脉取血处死,剪下致炎侧足踝关节,用 10 倍体积 10%中性甲醛溶液固定,不同浓度梯度乙醇逐级脱水,石蜡包埋、切片、苏木素-伊红(HE)染色,显微镜下观察大鼠踝关节滑膜病理变化[64]。

2.4.5 血清 CRPNO 的水平测定

末次给药 1 小时后,采用乙醚吸入麻醉,腹主动脉取血,室温静置 30 min,于冷冻离心机 4oC 3500 r·min-1,离心 15 min,分离血清,-80oC 保存备用,采用 ELISA 试剂盒对血清中CRP、采用硝酸还原法对血清 NO 含量进行检测。

2.4.6 血清 IL-1β、TNF-α、IL-17 的水平测定

末次给药 1 小时后,采用乙醚吸入麻醉,腹主动脉取血,室温静置 30 min,于冷冻离心机 4oC 3500 r/min,离心 15 min,分离血清, -80oC 保存备用,采用 ELISA 法对血清中 IL-1β 、TNF-α 、IL-17 水平进行检测。

2.4.7 膝关节滑膜 NF-κB 的水平测定

取大鼠左右后足膝关节滑膜,称重。用磷酸盐缓冲液(Phosphate buffered salt , PBS)清洗滑膜 2 次,在使用前 5min,取适当量 PMSF 加入中等强度 RIPA 裂解液中,使最终浓度为1mmol L-1研磨,4 裂解 80 min。于 412000 r min-1离心 15min 取上清,采用 ELISA 法对其进行 NF-κ B 水平进行检测[48]。

.技术路线(见下图)

本课题围绕上述问题, 利用代谢组学液相色谱与质谱联用(Liquid chromatograph massspectrometryLC-MS)技术分析方法探讨藏药翼首草总苷对 RA 的治疗。实验采用佐剂性关节炎大鼠模型,给予翼首草总苷溶液,将血清代谢组学结合病理生理和临床生化指标,挖掘佐剂性关节炎大鼠差异性代谢物、代谢通路及影响的代谢网络,确定佐剂性关节炎的发病机制;发现翼首草总苷对佐剂性关节炎(Adjuvant ArthritisAA)大鼠中差异性代谢物、代谢通路的扭转情况,确定翼首草总苷治疗 AA 大鼠的作用机制以及疗效,为藏药翼首草总苷类成分治疗 RA 提供科学依据。同时,建立藏药疗效评价和作用机制研究的代谢组学研究方法。

4.可行性分析

前期实验已经

从上面的分析来看,本课题在理论和逻辑上是可行的。

RA 作为世界范围疾病,国际风湿病学家对其定义为缺乏明显症状和体征的炎性疾病。其有效管理期在疾病发生后有 3-6 个月,针对这狭窄的治疗缓解窗口[60],RA 疾病的早期诊断极其必要。RA 尽管有众多研究,然具体发病机制仍然没有得到确定,对 RA 发病机制的研究,极大程度上也是开发疗效确切的 RA 治疗药物的关键突破口。因此,对 RA 发病机制的研究迫在眉睫。RA 作为慢性疾病,目前国内外用于缓解治疗 RA 药物大多不仅价格昂贵,且具有较强的毒副作用,不适宜患者长期服用。现代研究数据汇总表明藏医治疗 RA 有较高有效率,其提取物也具有抗风湿效果,因此对翼首草主要成分—总苷类成分治疗 RA 的药效和对 RA 的作用机制的研究,不仅有利于开发能够长期应用于 RA 新药,且有利于推动藏医、藏药事业发展。

代谢组学把人体作为一个完整的系统来研究,与藏医理论中的整体观相似,从而给藏药复杂理论体系的研究提供了新的思路。藏药与中药相同相似,具有多成分的特点,其特点决定了藏药治疗的作用机制与生物体对药物的处理是一个多成分、多靶点、多途径的作用过程。换而言之,这也是一个多成分的“药物系统”对复杂的“生物体系统”,“多成分的药物网络”经过“多靶点网络”对“多种内源性代谢物网络”的作用过程。其复杂过程决定了通常药物筛选的方法往往不能奏效。同时,RA 是一种慢性系统性自身免疫性疾病,采用代谢组学系统生物学技术从生物体细微的代谢物变化对藏药、中药总体作用进行评价,可能会从“系统”这个不同视角发现新药。目前,应用代谢组学技术研究治疗 RA 的中药已有不少,例如云南白药、黄连解毒汤、四妙丸、乌头汤、雷公藤多苷、铁线莲三萜皂苷、新痹痛灵、复方祖师麻等[66-71],应用代谢组学技术研究治疗 RA 的藏药还鲜为人知。本研究采用代谢组学 LC-MS技术,利用 AA 大鼠模型,通过对 AA 大鼠的血清差异性代谢标志物的研究,了解藏药翼首草总苷对 AA 大鼠的代谢途径,代谢网络的影响,探讨翼首草总苷对 AA 大鼠作用疗效及作用机制。推测,翼首草总苷对 RA 患者血清产生的可能的差异性代谢标志物,对 RA 患者可能的作用疗效及作用机制。

2)本课题是本人前期工作的延续,本人对

本研究团队自 2001 年以来,对藏药翼首草的研究从未曾间断,先后完成翼首草相关的多个研究。先后通过化学实验确定了藏药翼首草的含有的大部分化学成分,部分化学成分的含量,各地翼首草成分的差异,证实了翼首草中主要含有三萜皂苷类和环烯醚萜类,提出了翼首草质量标准的提高[57-58],优化了翼首草总苷(Total Glucosides of Pterocephali HerbaTGPH)的提取方式,并申请了翼首草总苷的提取专利[59]。研究团队通过药理实验研究了翼首草提取物中入血成分[57],确定了翼首草提取物具有抗炎、抗风湿、免疫抑制和镇痛的效果[42-43]。同时,通过团队的前期挖掘,四川省甘孜藏族自治州藏医院著名藏医专家唐卡 昂翁降措藏医主任医师藏医临床长期应用多年的治疗”真布病”(RA)经验,开发出口服治疗”真布病”(RA)的藏药复方”然降多吉胶囊”(以翼首草为主药)[37]。该药物已获得国家临床研究批文,长期临床验证该药抗 RA 疗效显著[33]。

3)本课题所涉及的技术均为较成熟的技术,所需的设备和条件本校都具备。

实验仪器

     Varioskan Fish 2.4.3 型全波长多功能读数仪(美国 Thermo 公司)PV-200 足趾容量测定仪(成都泰盟科技有限公司)。湘仪 H2050R 台式高速冷冻离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司)2016 型转轮式切片机(德国徕卡公司)BMJ-Ⅲ型包埋机(常州郊区中威电子仪器厂)。数码三目摄像显微镜(BA400Digital,麦克奥迪实业集团有限公司)。图像分析软件 Motic ImagesAdvanced

药物

   翼首草为川续断科植物匙叶翼首草 Pterocephalus hookeri (Clarke) Hoeck 的干燥全草。所用翼首草经成都中医药大学民族医药学院张艺研究员鉴定。实验中所需翼首草总苷粉末由成都中医药大学民族医药学院提取并进行质量分析,采用水煎煮,大孔树脂吸附,乙醇洗脱纯化制备[59]。醋酸地塞米松片,浙江仙琚制药股份有限公司生产,批号:140141,规格 0.75mg

1.4 动物

SD 大鼠,雄性,SPF 级,48 只,体质量(170 10) g,购自四川省医学科学院实验动物研究所,动物质量合格证号:SCXK()2013-15。成都中医药大学药学院实验动物观察室,实验动物观察许可证号 SYXK(川)2014-124。室内光照 12h、黑暗 12h,湿度 40-60%,温度 20-25oC,通风条件良好,环境相对安静。

(四)本课题的特色与创新之处

本研究基于药效学以及 LC-MS 技术为基础的代谢组学方法,对藏药翼首草总苷治疗 RA的疗效以及相关机制进行研究。药效学实验中翼首草总苷对 AA 大鼠的足趾肿胀率、滑膜病理指标、血清 CRPNOIL-1β 、TNF-α 、IL-17 具有良好的改善作用表明了翼首草总苷对 RA具有治疗作用;翼首草总苷降低血清 CRPNOIL-1β 、TNF-α 、IL-17 异常升高的同时,也能够降低滑膜 NF-κ B 水平,而 IL-1β 、TNF-α 、IL-17 NF-κ B 信号通路的下游因子,因此,翼首草总苷降低血清 IL-1β 、TNF-α 、IL-17 可能是通过影响 NF-κ B 信号通路为机制。

    代谢组学实验中,通过过翼首草总苷药效趋势 PCA 得分图,证实了翼首草总苷对 RA 具有治疗作用。通过 PLS-DA 结合 T-test 检验以及 Metlin 数据库 AA 大鼠血清中鉴定出 27 个差异性代谢物。这些差异性代谢物包括尿素、色氨酸、焦谷氨酸、脯氨酸、磷酸胆碱、吲哚丙烯酸、吲哚、组氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、琥珀酸半醛、丝氨酸、嘌啉、油酸、苹果酸、亚麻酸、甘氨酸、甲酰丙酮酸、肌酸、5(S)-HpETEPS(14:0/12:0)PS(21:0/0:0)PS(20:0/0:0)PS(19:0/0:0)PG(17:0/0:0)PG(12:0/12:0)PC(19:3(10Z,13Z,16Z)/0:0)。发现翼首草总苷对 27个差异性代谢物中 15 个进行了回调。回调代谢物包括尿素、色氨酸、脯氨酸、磷酸胆碱、吲哚丙烯酸、吲哚、组氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸、苹果酸、肌酸、亚麻酸、PS(14:0/12:0)PS(21:0/0:0)。通过差异性物代谢物通路富集分析显示,AA 大鼠体内精氨酸和脯氨酸代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成,色氨酸代谢,嘌呤代谢,谷胱甘肽代谢 7 条代谢通路具有明显影响。

    通过代谢组学实验结果结合其他学者的RARA模型代谢组研究成果讨论得出,色氨酸、吲哚、精氨酸、脯氨酸、丝氨酸、谷氨酰胺可作为临床 RA 疾病的潜在生物标志物。同时,NF-κ B 信号通路,TCA 循环,色氨酸代谢,精氨酸与脯氨酸代谢,组氨酸、丝氨酸、苏氨酸代谢、嘌呤代谢与 RA 疾病以及 RA 的药物治疗极为相关。

   上所述色氨酸、吲哚、精氨酸、脯氨酸、丝氨酸、谷氨酰胺 6 个代谢物可作为临床RA 疾病的潜在生物标志物,药效学与代谢组学实验结果证实炎症反应,NF-κ B 信号通路、TCA 循环、色氨酸代谢、精氨酸与脯氨酸代谢、组氨酸与丝氨酸与甘氨酸代谢通路与 RA 的发病以及翼首草总苷治疗 RA 的作用机制有关。

(五)年度研究计划及预期研究结果

1.年度研究计划

2.预期研究结果

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